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在ELISA實(shí)驗(yàn)中，洗滌是關(guān)鍵步驟之一。而有一些參數(shù)會(huì)影響洗滌步驟的效果，這些參數(shù)包括吸液高度和吸入位置，這兩者都能調(diào)整，以降低背景(殘留量)和差異。下面我們就一起來看看今天的重點(diǎn)內(nèi)容，上海通蔚生物與您初夏談?wù)fELISA抽吸的操作技巧。
殘留液體中包含未結(jié)合的抗原或抗體，它們會(huì)增加背景信號。殘留量越小，殘留液體越少，轉(zhuǎn)移到下一步的干擾液體也就越少。吸液高度會(huì)明顯影響殘留量；如果洗滌吸頭與反應(yīng)孔底部的距離稍大，那就會(huì)讓殘留量急劇增加。反之，如果洗滌吸頭壓著反應(yīng)孔底部，那么也會(huì)使吸液效率降低，殘留量增加。
目前的洗板機(jī)一般使用兩種類型的洗頭：剛性和浮動(dòng)的。浮動(dòng)洗頭中的吸頭可在洗滌過程中自由上下移動(dòng)，而剛性洗頭則固定在適當(dāng)?shù)奈恢?。使用剛性洗頭的洗滌操作在優(yōu)化起來更為復(fù)雜，因?yàn)槟阈枰浅Ｗ屑?xì)地調(diào)整吸液高度。如果你們實(shí)驗(yàn)室使用幾種不同的板，那可能會(huì)很耗時(shí)。在使用浮動(dòng)洗頭時(shí)，吸頭會(huì)降到反應(yīng)孔的底部。調(diào)整高度就不是很重要，因此洗頭會(huì)下降到底部。
抽吸的位置也對殘留量有著重要影響；如果每個(gè)孔只使用一個(gè)抽吸點(diǎn)(這很常見，因?yàn)楦?，那么抽吸的位置需要優(yōu)化。*的位置取決于洗頭的性狀，但它幾乎不在反應(yīng)孔的中間，即使這是所有洗頭zui常見的默認(rèn)位置。一般來說，*位置在孔中間與孔壁之間的某處。
反應(yīng)孔的形狀也會(huì)影響殘留量。C形底(平底圓角)的微孔板一般會(huì)比那些平底尖角的微孔板殘留量更低。
ELISA試劑盒如果沒有自動(dòng)洗板機(jī)，采用手工洗滌，那么也需要注意幾點(diǎn)。使用8道或12道微量移液器，采用倒吸的方法進(jìn)行洗滌；不同廠家的洗液不宜相互混用。洗板時(shí)需保證微孔板平放，將洗滌液注滿各孔，但盡量避免漏液，以每孔300 μl為宜；板洗次數(shù)一般為3次，要保證洗板的浸泡時(shí)間，每次浸泡時(shí)間一般為30-60 秒；盡量減少洗液殘留量，推薦每次洗板后進(jìn)行拍板，并及時(shí)更換吸水紙，避免吸水紙的碎屑粘到反應(yīng)孔內(nèi)。
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